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厂家浅谈富马酸检测方法

更新时间:2020-04-14 15:18   点击数: 次 来源:188体育投注

    厂家浅谈富马酸检测方法
    1、富马酸的理化性质:
    1.1、分子式C4HO4又名反丁烯二酸,分子量116.1
    结构式HOOC-CH
               =
               HC--COOH
    1.2、解离常数
    PK1=3.02,PK2=4.38.
    富马酸二钠(溶解度20%)
    富马酸二铵(溶解度40%)pH3.70
    富马酸一钠(溶解度10.7%)
    富马酸一铵(溶解度20%)pH2.7
    1.3、水中溶解度
    20℃,25℃,40℃,60℃,100℃
    0.5%,0.7%,1.05%,2.04%,8.93%
    酒精中溶解度:
    30℃ 5.75%,75℃ 4.76%。
    2、成品分析:
    试样1g,移入250m三角瓶中,加甲醇50ml,水浴中加热至溶解,冷却后加酚酞试剂数滴,用0.5mol/LNaOH溶液滴定至浅红色,持续30秒以上。每ml0.5mol/LNaOH-29.02mg富马酸。
    3、中间产品分析
    3.1、氧化法:用0.02mol/LKMnO4标准溶液滴定,取样品含富马酸(1~10mg)于50ml三角瓶中,加蒸馏水2ml,浓H2SO4滴,用0.02ml/LKMnO4,每3秒1滴,过量1滴,赤色不退为终点。
    3.3.1、原理:富马酸在pH≥8.5条件下,经1-天门冬氨酸酯反应与氨合成天门冬氨酸,再由天门冬氨酸脱羧酶在p≤6条件下,脱去CO2,专一性生成丙氨酸,用华勃呼吸仪测定释放出CO2微升数,计算天门冬氨酸含量再换算成富马酸含量。
    3.3.2测定:华勃呼吸仪:主室天门冬氨酸脱羧酶(德昆氏假单孢菌IAM52)丙酮干粉3%酶液0.5ml,0.2molL醋酸缓冲液(pH5.0)0.5ml,蒸馏水lrml,侧室样品0.5ml(含天门冬氨酸0.6~1.6mg)于37℃反应2030min,并做对照(侧室以蒸馏水代)记下释放出CO2徵升数。
    4、中间产品的分坜方法诃论:
    4.1、氧化法:所有具还原性性质均有干扰,如葡萄糖及其它还原糖,羟基酸中乳酸可氧化成2-羟基丙酸,苹果酸可氧化成草酰。
    乙酸,柠檬酸被KMnO4氧化成3-酮戊二酸。
    4.2、紫外分光法:具有紫外吸收性质的化合物在不同波长均有干扰,如肉桂酸在278m处有最大吸收值,苹果酸在385mm处有最大吸收值,酪氨酸色氨酸在240nm处有较大吸收值,谷氨酸在213mm处有最大吸收值。
    4.3、酶法:专一性较强。
    4.3.1、天门冬氨酸的菌种系大肠杆菌,培养基为肉汤谙莽基,除天门冬氨酸酶外,一般还有富马酸,将富马酸转化成苹果酸。
    4.3.2、天门冬氨酸脱羧酶以脱羧酸为主,但含有少量富马酸酶及丙氨酸消旋酶。
    4.3.3、大肠杆菌及德昆氏假单孢菌,经优化处理即调pH及加热可大幅度减少其它酶活力。

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